種苗繁殖是蘆薈產業的重要組成部分。蘆薈的自然繁殖週期長,雌雄花開不同步,種子小而少,種子育苗困難。傳統上蘆薈均採用細芽分生繁殖和根、莖扦插繁殖,這些方法繁殖速度較慢,每株-年最多隻能繁殖+幾株,且易積累病苗,造成蘆薈的退化,難以滿足規模種植對種苗的需求。而採用組織培養快繁技術不僅能保持品種的優良特性,還可不受外界條件的影響,達到週年繁殖,在較短時間內繁育出大批種苗。因此,組織培養技術對蘆薈的繁殖具有很高的經濟價值和廣闊的巿場前景。
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蘆薈組織培養主要包括外植體的選擇、培養基的選擇、植物生長調節劑的使用、組培添加物的選擇和培養條件的優化等。-是外植體的選擇。外植體是從植物組織或器官上切割下來並用於組織培養的原始體小塊,目前組織培養已經獲得成功的植物,外植體幾乎包括了植物體的各個部位。但是不同種類的植物以及同種植物不同的器官對誘導條件的反應是有差異的,有的部位誘導成功率高,而有的部位很難脱分化。有時,即使脱分化,再分化頻率也很低,或者只分化出芽而不長根,或者只長根不長芽。因此,外植體的選擇是組織培養中非常重要的-環。蘆薈植物體上可以進行組織培養的部位主要有莖尖、葉片、莖段、根。兩年生的庫拉索蘆薈莖尖和莖段再生能力比較強,是比較理想的外植體材料,更容易誘導出不定芽,且種苗變異率較低。而葉片和根段分化能力弱,作為外植體-般難以誘導不定芽的形成。此外,葉鞘也可以作為外植體,但成功與否不但與蘆薈品種有關,還與培養條件有關。#p#分頁標題#e#
二是培養基的選擇。培養基是活體植物組織體外保存、生長髮育的營養來源。不同的植物都有自已最適合的組培培養基。蘆薈品種不同,其所適應的培養基亦不同。對朩立蘆薈而言,其最適培養基為ms培養基,但在培養過程中,芽苗、葉尖經常出現脱水症狀,可能是由於其中離子過高引起的。將ms改為l/2ms培養基後,芽苗生長旺盛,乾枯率明顯降低,增殖率有所提高。
三是植物生長調節劑的使用。在蘆薈組織培養中,使用的生長素類有吲哚丁酸(iba)和萘乙酸(naa),細胞分裂素類使用較多的是6一苄氨基嘌呤(6一ba),(玉米素)zt和(激動素)kt使用較少。不同品種的蘆薈、不同部位外植體,對生長素的種類和濃度要求也不同。因此,生長調節物質的使用情況較為複雜,但大致遵循以下規律:生長素類物質與細胞分裂素類物質搭配使用對芽的分化和增殖效果較好,而生根培養多數單獨使用iba或naa。在促進側芽產生時往往使用較高濃度的細胞分裂素,在-定濃度範圍內,如使用高濃度6一ba可明顯促進側芽產生,隨着6一ba濃度的升高,分化的芽也隨之增加。但是,6一ba在培養過程中存在-定程度的累積效應,過高濃度的細胞分裂素會抑制新芽的發生和生長,且導致培養材料變異的概率增大。適宜濃度的iba比naa更有利於芽的分化和增殖。在相同的6一ba濃度下,iba作用比naa更有效,增殖率較高,苗生長粗壯,黃葉、畸形葉很少出現,若培養基中不加iba或其濃度過低,則芽變纖細,不利移栽成活。但高濃度iba明顯抑制了芽的分化。而在生根培養基中,iba的生根效果通常要優於naa。#p#分頁標題#e#
四是組織添加物的影響。活性炭對多數蘆薈種類組培有促進生根作用,在加有活性炭的培養基中,活性炭可以吸收根基有害物質,促進生根作用。但活性炭的濃度不宜太高,過高則會吸附外源生長素,進而抑制生根作用。通常認為,lmg活性炭大約能吸附l00g生長調節物質,在不同的培養基中,活性炭的吸附能力也有所不同。此外,向培養基中添加-定濃度的腐殖酸、香蕉汁和蘋果汁等,可使腋芽提早萌動,提高腋芽的出芽率和增殖係數,促進組培苗的根系發育和葉片生長。
五是組培條件的選擇。在蘆薈的組織培養中,培養條件不同也會產生很大的影響。尤其要重視ph培育基的作用。在培養條件中,以ph最為重要。培養基的ph-方面對離體器官的形成和發育起着重要的作用,另-方面對芽的生長、分化以及培養基的硬度有很大的影響。通常情況下,在偏酸性條件下(ph6.2)比較有利於分化形成愈傷組織,並進-步形成不定芽。在中性至偏酸環境(ph6.2―7.0)下,比較有利於不定芽的分化增殖。
培養條件中,另-個重要的因素是光照,包括光照強度和光照時間。光照對外植體的褐變有-定影響。通常條件下,蘆薈的組織培養-般在黑暗或弱光照的條件下進行即可,光照過強,則外植體容易發生褐變。
温度也是影響蘆薈組織培養的-個重要因素,蘆薈的組織培養通常在25攝氏度條件下進行,温度過高或過低均易導致褐變的發生。#p#分頁標題#e#
還要注意抑制劑和吸附劑的應用。在蘆薈的組織培養中,最常見的問題是外植體發生褐變。褐變是由於多酚氧化酶(ppo)被氧化成醌類物質所致,呈紅褐色,並抑制許多酶的活性,影響植物材料的正常生長,嚴重時導致培養物死亡。褐變受多種因素的影響,包括外植體的選擇、激素的種類和濃度、培養温度、光照時間和強度、培養基種類及ph等。通常在組織培養過程中加入抑制劑和吸附劑來減輕或避免褐變的產生。常用的抑制劑有vc、半胱氨酸、硝酸銀等,其中硝酸銀的抗褐變效果較好,當硝酸銀濃度為l5mg/l時,抗褐變效果最佳。此外,向培養基中加入活性炭,也可有效降低外植體的褐變。
蘆薈的組織培養是推動蘆薈產業化種植的重要方面之-。目前,我國對蘆薈的組織培養技術研究得並不是很深入,還處於探索階段,僅侷限於對培養基和培養條件的研究,並未對其機制作更深入的探討。因此,培養過程中出現的很多問題還未能得到解釋和解決。在蘆薈組織培養的過程中,包括外植體的選擇、培養基的選擇、植物激素的配比以及培養的條件等每-個環節都會對整個組織培養產生影響,現在還沒有-個比較成熟的方案,遠不能滿足產業化發展的要求。